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谱康医学 | 单管检测35人份PBMC——大队列样本编码策略
谱康医学 | 单管检测35人份PBMC——大队列样本编码策略
发布时间:2024-08-09
来源:d88尊龙人生就是博公众号
浏览量:1402
大队列流式样本编码策略
在大队列流式样本研究中,为保证样本间实验操作的一致性,通常会先对每份样本进行barcoding编码,然后将所有样本混合成1管,进行统一的后期抗体染色等实验步骤。同批次对多个样本进行处理,可节约抗体等试剂,节省操作时间和重复性操作成本,减少因人工操作和机器状态带来的单个样本差异性,极大的提高实验结果的可靠性和准确性。
本次实验采用活细胞barcoding编码方案,用Cd(111Cd、112Cd、116Cd)和Pt(194Pt、195Pt、196Pt、198Pt)标记的CD45作为编码抗体试剂,从7种同位素中任选3种,以金属组合编码的方式标记不同细胞样本,将样本编码上限拓展到了35人份。相比于市面上的20-plex Pd Barcoding编码需要先对细胞进行固定破膜,使用活细胞barcoding编码可以避免部分抗体在固定破膜后特异性不好、染色效果不佳的缺陷。
本实验使用
谱康医学 MSFLO 质谱流式细胞仪
分析检测 35 人份混合编码的外周血样本免疫细胞。MSFLO 质谱流式细胞仪是先进的悬液单细胞蛋白检测平台,具备高灵敏、高通量、多靶标的单细胞蛋白组学检测能力,以及溶液、单细胞、单颗粒等多种工作模式,其强大的算法可实现多种单细胞编码方式的解码功能。
此外,该编码方式具备一定的可拓展性,以Cd(7种金属同位素)和Pt (4种金属同位素)标记的CD45为例,采用11选3方案,最多可进行165人份样本同批次处理与单管上样,为临床大样本队列和高通量药物筛选研究做准备。
应用方案
仪器配置
MSFLO 台式质谱流式细胞仪
实验设计
(1)Barcoding 设计
(2)主要试剂
结果分析
通过算法对混合样本进行解码,可有效鉴别35种编码方式对应的35个样本文件,热图和tSNE也能进一步证实35个样本之间区分明显,分离效果优秀。
(1)文件解码
(2)可视化分析
35个样本CD45 histogram
35个样本CD45 heatmap
35个样本tSNE分布
(3)对解码后35个样本进行CD4/CD8 T cells、B cells、Monocytes和NK cells分群圈门,各细胞亚群分群效果较好,亚群比例统计结果如下:
解码后的35个样本以CD4/CD8 T细胞为例的分群效果:
谱康医学 MSFLO 质谱流式细胞仪致力于为生命科学领域提供强大的单细胞、多靶标检测技术手段,满足单细胞 40 色及以上检测指标需求,且通道间基本无串扰、无需调节补偿,背景信号低,工作模式丰富,为不同科学研究领域提供强有力的技术解决方案。
d88尊龙人生就是博生命科学板块旗下杭州谱康医学科技有限公司,成立于2020年,以流式细胞检测技术为核心,提供专业化的硬件及配套试剂,同时为客户开发开展定制化服务。公司坚持流式细胞仪产业化协同发展战略,拥有高学历流式设备专业研发团队,标准化的GMP生产车间,丰富的实验室建设经验,成熟的实验室管理体系,已经全面掌握流式核心的设备制造技术及设备集成的开发能力,旨在为客户提供整套细胞解决方案。
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